Tesis doctoral de Silvia Vergara Jauregui Letamendia
En una búsqueda de proteínas que interaccionaban físicamente con el dominio c-terminal de glut4, con el sistema de doble híbrido de levadura, identificamos el dominio carboxilo de daxx y el dominio carboxilo terminal de una proteína desconocida a la que denominamos kis. La intervención encontrada por el doble híbrido entre c-glut4 y c-kis y c-glut4 y c-daxx fue validada por la capacidad del c-glut4 traducido in vitro de interaccionar con el daxx silvestre, el c-daxx y el c-kis traducido in vitro. C-daxx y c-kis no interaccionan con el dominio c-citoplasmático de glut1, el transportador de glucosa expresado de forma ubicua y homólogo a glut4. La anulación de la señal dileucina (leu489leu790), crítica para el transporte de glut4 desde la red trans del golgi al compartimento perinuclear de almacenaje, y para su internalización desde la superficie celular por endocitosis, por la substitución del par leuleu por el par ala-ser inhibió en un 50% la interacción entre c-glut4 y c-daxx, mientras que la introducción de una alanina entre las dos arg que preceden al par dileucina, inhibió completamente la interacción de c-kis y c-glut4. la daxx y el glut4 contenidos en fibroblastos 3t3-l1 transfectados establemente con glut4, así como en adipocitos 3t3-l1, son coinmunoprecipitados con anticuerpos contra glut4 y daxx, respectivamente. Utilizando un procedimiento bien establecido de fraccionamiento celular, demostramos evidencia de la existencia de dos poblaciones intracelulares de daxx en el núcleo y en los microsomas de baja densidad. Estudios de microscopía confocal localizaron a daxx en los cuerpos pods y en estructuras vesiculares en el citoplasma, frecuentemente organizadas en hileras y bajo la membrana plasmática. También presentamos evidencias de que tanto glut4 como daxx son conjugadas a sumo-1. hemos caracterizado una nueva proteína a la que hemos denominado kis, codificada por un mrna de 2.4kb. Sorprendentemente, el
Datos académicos de la tesis doctoral «Identificación de daxx y kis como proteínas que interaccionan con la señal de retención dileucina contenida en el dominio carboxilo terminal de glut4, el transportador de glucosa sensible a insulina«
- Título de la tesis: Identificación de daxx y kis como proteínas que interaccionan con la señal de retención dileucina contenida en el dominio carboxilo terminal de glut4, el transportador de glucosa sensible a insulina
- Autor: Silvia Vergara Jauregui Letamendia
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 18/03/2004
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Vassiliki Lalioti
- Tribunal
- Presidente del tribunal: balbino jose Alarcon sanchez
- dionisio Miguel Martín zanca (vocal)
- isabel Guerrero vega (vocal)
- José González castaño (vocal)