Tesis doctoral de Estela Area Gomez
El genoma del virus de la gripe está estructurado en forma de ribonucleoproteínas o rnps, las cuales a su vez están constituidas por el rna viral, de cadena sencilla y polaridad negativa, cuyos extremos parcialmente complementarios forman una estructura denominada en «mango de sartén» o panhandle. a lo largo de toda la longitud del rna se sitúa la nucleoproteína y en su extremo las 3 subunidades de la polimerasa pb1, pb2 y pa, cerrando la estructura de la rnp. se ha obtenido la estructura tridimensional de una ribonucleoproteína del virus de la gripe reconstituida in vivo a partir de proteínas recombinantes y un vrna modelo. Esta estructura, derivada por microscopía electrónica de muestras teñidas es circular y contiene 9 monómeros de nucleoproteína y el complejo de la polimerasa conectado a dos de estas nucleoproteínas adyacentes. se ha optimizado el proceso de purificación de ribonucleoproteínas mediante la introducción de un tag de histidinas en una de las proteínas recombinantes expresadas in vivo. El complejo así reconstituído fue purificado mediante cromatografía de afinidad a resina de níquel. La estructura de la polimerasa viral presente en el complejo de la ribonucleoproteína fue determinada mediante reconstrucción tridimensional de muestras de imágenes de microscopía electrónica de muestras teñidas. Con una resolución de 25a, la estructura obtenida muetra la presencia de sus tres subunidades. La localización de dominios específicos en la polimerasa fue determinada mediante análisis tridimensional de complejos de ribonucleoproteínas unidas a anticuerpos monoclonales específicos para el dominio aminoterminal de pb2 y el dominio carboxiterminal de pa. La presencia de masas extra en el complejo, que corresponden a los anticuerpos unidos, indica la posición de dichos dominios de las subunidades pb2 y pa dentro de la polimerasa. La localización de dominios específicos de la subunidad pb1 se l
Datos académicos de la tesis doctoral «Modelos tridimensionales de la ribonucleoproteína y la polimerasa recombinantes del virus de la gripe«
- Título de la tesis: Modelos tridimensionales de la ribonucleoproteína y la polimerasa recombinantes del virus de la gripe
- Autor: Estela Area Gomez
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 16/02/2004
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Juan Ortin Monton
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Francisco Parra fernandez
- crisanto Gutierrez armenta (vocal)
- Rodríguez aguirre José Francisco (vocal)
- José María Carazo garcia (vocal)