Tesis doctoral de Gerardo Vizmanos Lamotte
Introducción: la inducción de esputo es una técnica escasamente invasora para el estudio y la monitorización de la inflamación de la vía aérea. objetivos: el objetivo principal del estudio fue comparar el perfil celular y los niveles de citoquinas th1 y th2 en esputo inducido entre niños asmáticos atópicos, asmáticos no atópicos y sanos. métodos: la inducción de esputo fue realizada mediante inhalación de suero salino hipertónico a concentraciones crecientes (3%, 4% y 5%). Se determinó la fracción exhalada de óxido nítrico en los pacientes asmáticos y se midió la fev1 al inicio y después de cada período de inhalación para garantizar la seguridad de los niños. el procesado del esputo se hizo siguiendo el método de pizzichini y cols. Se separó el esputo de la saliva y se añadió un volumen de solución de ditiotreitol igual a 4 veces el peso del esputo. Se agitó la mezcla y después de colocarla en banco mecedor durante 10 minutos se añadieron 4 volúmenes de pbs de dulbecco. La suspensión resultante se filtró a través de una gasa de nylon de 48 micras, centrifugándose a continuación durante 10 minutos a 2.500 rpm para obtener un pellet (sedimento) celular donde se determinaron el recuento celular total y la viabilidad celular y un sobrenadante que se guardó a -80ºc para la determinación de citoquinas. Se consideró una buena muestra si la viabilidad celular era > 60% y la contaminación por células escamosas < 20%. Mediante citocentrífuga se obtuvieron las preparaciones y tras tinción de may-grí¼nwald-giemsa se realizó el recuento celular diferencial con microscopio óptico. Los niveles de ifn-gamma, il-2, il-10, il-8, il-6, il-4, il-5, il-1beta, tnf-alfa, e il-12p70 en el sobrenadante se determinaron mediante citometría de flujo (bender medsystem, usa). el análisis estadístico se realizó con el programa spss15.0. Se aplicaron los siguientes tests paramétricos o no paramétricos según los grupos seguían o no una distribución normal (prueba de normalidad de kolmogorow-smirnov), y según fuera apropiado: t de student para datos no apareados, análisis de la varianza de una vía, test no paramétricos de la u de mann-witney, y de kruskal-wallis, chi-cuadrado, prueba exacta de fisher y correlación lineal de pearson. Se consideraron significativos valores de p < 0,05. Los resultados se expresaron como media y desviación estándar (de) o mediana y rango intercuartílico. resultados: se realizó inducción de esputo a 77 niños asmáticos (52 varones) y a 31 sanos (17 varones) de 7 a 15 años. Entre los asmáticos, 51 no recibían tratamiento y 26 recibían corticoides inhalados. Diecisiete pacientes presentaban un asma no atópica y 60 asma atópica. Se obtuvieron 64 muestras en los asmáticos (83,1% de las inducciones) y 24 muestras en los niños sanos (77,4%) de las que 49 y 18 adecuadas respectivamente. la mediana de eosinófilos en esputo inducido de los asmáticos atópicos (1,5%) fue mayor que en los no atópicos (0%) (p=0,02) y que en los niños sanos (0%) (p=0,003). Las citoquinas th2 (il-4 e il-5) y th1 (ifngamma, il-2 e il-12p70) fueron superiores en los asmáticos atópicos que en los sanos y en los asmáticos no atópicos (p<0,0001). La il-8 fue mayor en los niños asmáticos (atópicos y no atópicos) que en los controles (p<0,0001). La il-10 fue mayor en los controles que en los asmáticos atópicos (p=0,03). No existieron diferencias en el resto de citoquinas (il-6, il-1beta y tnf-alfa). conclusiones: el perfil inflamatorio de los niños asmáticos muestra un aumento en las citoquinas proinflamatorias en el esputo inducido respecto a los niños sanos. Existen diferencias en el perfil de citoquinas en esputo inducido entre los niños asmáticos atópicos y no atópicos.
Datos académicos de la tesis doctoral «Tipificación del fenotipo inflamatorio en el asma bronquial en niños de 7 a 14 años, mediante recuento celular y determinación de citoquinas en esputo inducido«
- Título de la tesis: Tipificación del fenotipo inflamatorio en el asma bronquial en niños de 7 a 14 años, mediante recuento celular y determinación de citoquinas en esputo inducido
- Autor: Gerardo Vizmanos Lamotte
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 17/12/2010
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Antonio Moreno Galdó
- Tribunal
- Presidente del tribunal: ricardo Closa monasterolo
- eduardo González pérez-yarza (vocal)
- (vocal)
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