Tesis doctoral de Alicia Del Carmen Humanez álvarez
Resumen el pino marítimo (pinus pinaster aiton) es la conífera más abundante en los bosques de la península ibérica, cubriendo en españa una superficie de 1.200.000 ha. La gran diversidad genética encontrada entre poblaciones de la especie sugiere un elevado potencial de adaptación, lo que ha llevado a varios grupos de investigadores españoles, integrados en la red genómica forestal, a utilizar esta especie como modelo para estudiar la respuesta adaptativa de los pinos al estrés hídrico desde una aproximación genómica. Estas investigaciones permitirán seleccionar genotipos tolerantes a estrés hídrico así como genes implicados en dicho proceso. En este contexto la disponibilidad de protocolos de propagación del pino marítimo se hace imprescindible y el cultivo in vitro representa una herramienta de gran utilidad para este fin. El presente trabajo describe protocolos de propagación in vitro de pinus pinaster mediante la vía organogénica y embriogénica, a partir de genotipos pertenecientes a las zonas atlántica y mediterránea, descritas para la especie. con el objetivo de obtener material necesario para iniciar los experimentos de propagación, se realizaron varios ensayos de germinación utilizando semillas enteras y embriones aislados. La germinación ex vitro de semillas estratificadas de pino marítimo se considera una buena estrategia para superar su dormición; no obstante, su éxito depende del genotipo. Por ello, el cultivo de embriones aislados, previa esterilización de las semillas, es el método más adecuado para obtener plántulas en un corto periodo de tiempo. se ha promovido la proliferación de yemas axilares y adventicias a partir de material de origen adulto (yemas apicales) y juvenil (ejes embrionarios y cotiledones). las yemas apicales de origen adulto se establecieron in vitro en medio dcr sin reguladores de crecimiento. Para inducir la proliferación de axilares se añadió ba al medio de cultivo. se ha estudiado el efecto de varias citoquininas tanto sobre la proliferación de yemas axilares en ejes embrionarios como sobre la inducción de yemas adventicias en cotiledones de pino marítimo. Para ambas respuestas organogénicas, el tidiazuron (tdz) mostró una capacidad de inducción de yemas superior a la de las otras citoquininas ensayadas [benciladenina (ba), zeatina (z), clorofenil urea (cppu) y topolina (top)]. el enraizamiento de los tallos obtenidos se vio favorecido por la presencia de acículas en la base del tallo y el cultivo ex vitro tras la aplicación de pulsos de auxina. Así mismo, la infección basal de los tallos con el hongo micorrícico pisolithus tinctorius, en condiciones in vitro, promovió el enraizamiento incluso sin la aplicación de auxinas. mediante la vía embriogénica se ha logrado regenerar plantas a partir de megagametofitos con embriones zigóticos en varios estadíos de desarrollo. También se han obtenido líneas embriogénicas mediante el cultivo de secciones de yemas apicales de árboles adultos, aunque no ha sido posible su proliferación ni mantenimiento. mediante técnicas histológicas, se ha correlacionado la capacidad embriogénica de los megagametofitos con el estado de desarrollo del embrión zigótico, observándose que la capacidad embriogénica de los mismos se incrementa cuando el embrión zigótico ha alcanzado el estado precotiledonar. Se observó también un claro efecto del genotipo. de los dos medios de cultivo ensayados (dcr y mlv), ambos suplementados con 2,4-d (ácido 2,4-diclorofenoxi-acético) y ba, el medio mlv favoreció la inducción de un mayor número de líneas embriogénicas. Tras cuatro meses de cultivo, el porcentaje de líneas embriogénicas establecidas y con capacidad de proliferación fue similar para ambos medios de cutltivo. La proliferación /amplificación de estas líneas se incrementó con la disgregación de los cultivos en medio líquido y posterior recogida de los mismo sobre papel filtro, colocado en la superficie del medio de cultivo. con el objetivo de evitar el subcultivo frecuente de las líneas embriogénicas, se ha desarrollado un protocolo de criopreservación, que incluye el tratamiento con maltosa y una solución crioprotectora de dmso y peg, el cual permite su almacenamiento y posterior recuperación. para la maduración de los embriones somáticos se ha estudiado el efecto de la concentración de aba aplicada mediante pulsos o incluida en el medio de cultivo, del carbón activo, de la desecación parcial y de la antiauxina pcib. Tanto la adición de carbón activo al medio de resuspensión, como la desecación parcial de los cultivos embriogénicos favorecieron la maduración de los embriones somáticos hasta el estado cotiledonar. los embriones maduros germinaron en medio sin reguladores de crecimiento. Las plántulas obtenidas se aclimataron y transfirieron a condiciones de invernadero.
Datos académicos de la tesis doctoral «Biotecnología aplicada ala propagación y conservación de recursos forestales de pinus pinaster aiton«
- Título de la tesis: Biotecnología aplicada ala propagación y conservación de recursos forestales de pinus pinaster aiton
- Autor: Alicia Del Carmen Humanez álvarez
- Universidad: Universitat de valéncia (estudi general)
- Fecha de lectura de la tesis: 16/07/2009
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Isabel Arrillaga Mateos
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Juan Segura garcia del rio
- María no Toribio iglesias (vocal)
- araceli Barcelo muñoz (vocal)
- ester Sales clemente (vocal)